L'habitat naturale dei pipistrelli vampiri è un ambiente caldo, tropicale o subtropicale. Possono essere trovati ad altitudini fino a 2400 metri e in genere vivono in aree con illuminazione moderata.
I pipistrelli dei vampiri vivono in colonie di circa 100 pipistrelli, sebbene in una singola colonia ce ne possano essere almeno 1.000. Queste colonie vivono in caverne, cavità di alberi, edifici abbandonati, vecchi pozzi minerari e altri luoghi bui. Dormono durante il giorno, appesi a testa in giù in cima alla loro residenza, e escono a cacciare di notte. I pipistrelli dei vampiri sono gli unici mammiferi che vivono del sangue caldo delle loro prede, in genere bovini, cavalli o altri animali da fattoria, e colpiscono da terra.
