La soluzione di iodio funziona come un mordente che rende la macchia più prominente e il colorante viola cristallino si lega più strettamente alla cellula batterica. L'aggiunta di soluzione di iodio o cloruro di potassio è il secondo passo nel processo di colorazione del grammo.
La colorazione di Gram è la tecnica più comune e più utilizzata per distinguere tra batteri Gram-negativi e Gram-positivi. Questo processo si basa sul principio che i batteri reagiscono in modo diverso al loro ambiente, reagendo così (o macchiando) in modo diverso, aiutandone l'identificazione.
Il processo di colorazione dei grani comprende i seguenti passaggi:
Passaggio 1
I batteri vengono trattati con la tintura di cristallo viola, quindi con la soluzione di iodio.
Passaggio 2
Dopo la colorazione, gli agenti decoloranti vengono aggiunti al campione. Questo disidrata, restringe e stringe lo strato di peptidoglicano dei batteri. Gli agenti coloranti sono intrappolati all'interno delle cellule dei batteri gram-positivi a causa del suo strato di peptidoglicano più spesso, mentre i batteri gram-negativi non saranno in grado di trattenere la macchia a causa del suo strato sottile.
Passaggio 3
Una colorazione di contrasto viene aggiunta al campione colorandolo di rosso. La colorazione rossa non cambia il colore della colorazione viola delle cellule gram-positive. Al contrario, aggiunge un colore rosso ai batteri gram negativi.
