I testicoli, situati nello scroto, producono e secernono testosterone. Anche se svolge un ruolo minore nella loro salute riproduttiva, le ovaie delle donne creano e secernono anche piccole quantità di testosterone. In entrambi i sessi, è l'ipotalamo e la ghiandola pituitaria che determina la quantità di testosterone prodotta.
Piccole quantità di questo ormone sono anche secrete dalle ghiandole surrenali. Il testosterone è l'androgeno primario nei maschi, e l'aumento dei livelli di questo ormone durante la pubertà determina lo sviluppo di peli sul viso, aumento di altezza e massa muscolare, una voce più profonda e una mela di Adamo. Il testosterone è anche essenziale per lo sviluppo sano del sistema riproduttivo maschile.