Gli zuccheri non producono risultati positivi in un test di fermentazione. La fermentazione è il processo in cui gli zuccheri vengono convertiti in un prodotto chimico diverso. In un test di fermentazione, vengono utilizzati zuccheri specifici per determinare la presenza di batteri. Un risultato positivo sarebbe la formazione di acido, gas o alcol.
Gli zuccheri utilizzati in un test di fermentazione sono selezionati in base ai prodotti che diventano e ai batteri che determinano tale risultato. Ad esempio, l'agar sale mannitolo uccide la maggior parte dei batteri ad eccezione dei batteri Staphylococcus resistenti al sale. Solo alcuni ceppi di Staphylococcus reagiscono con il mannitolo nell'agar, come lo Staphylococcus aureus, che produce sottoprodotti acidi. L'agar sale di mannitolo ha un indicatore di pH rosso che diventa giallo in presenza di livelli di acidità più elevati a significare questa reazione.
I test di fermentazione vengono eseguiti su supporti diversi a seconda del risultato desiderato e dei batteri testati. I due mezzi più comuni sono brodi e agar. L'agar è un composto simile alla gelatina prodotto dalle alghe marine che consente alla maggior parte dei batteri di crescere sulla sua superficie e può essere infuso con vari nutrienti e sostanze chimiche. Un brodo è costituito da soluzioni di prodotti chimici. I media che limitano determinati tipi di crescita sono indicati come selettivi. I media che mostrano un cambiamento fisico e vengono utilizzati per testare determinati prodotti sono indicati come differenziali. Questi media differenziali sono la base per molti test di conferma, inclusi i test di fermentazione.