I gufi adulti non cadono in genere preda di altri animali come fonte di cibo, anche se le vespe, i gatti, le linci rosse, i coyote, i procioni e gli orsi neri americani mangiano le vespe e le uova di gufo. Alcuni altri animali che mangiano i nidiacei o le uova includono opossum, corvi e corvi. In alcuni casi, i nidiacei, i nidiacei afflitti o affamati vengono consumati dai genitori o dai fratelli,
Falchi, aquile nordamericane e altri gufi a volte predano gufi adulti, ma questo è in genere causato da dispute territoriali. Anche alcuni gufi adulti cadono vittima delle loro prede. Gli esseri umani spesso rappresentano il pericolo maggiore per i gufi attraverso la distruzione degli habitat, lasciando ai gufi un numero minore di aree in cui cacciare e nidificare. Ciò provoca ancora più dispute tra i gufi che sono in competizione per un minor numero di risorse disponibili. Le automobili rappresentano anche un grande pericolo per i gufi che cacciano e atterrano lungo le strade perché questi gufi sono spesso colpiti dalle auto che passano. Alcuni gufi vengono anche uccisi quando volano in strutture o oggetti creati dall'uomo, come edifici, recinti di filo spinato o linee elettriche. Gli esseri umani uccidono anche i gufi intenzionalmente attraverso l'uso di pistole, trappole o veleno. Alcuni gufi vengono avvelenati involontariamente quando ingeriscono roditori che hanno mangiato del veleno o vengono a contatto con il famphur topico sui bovini.
Il gufo delle nevi e il grande gufo cornuto cacciano altre specie di gufi perché sono territoriali. Se questi gufi infrangono il loro territorio, il gufo delle nevi e il grande gufo cornuto li mangiano per ridurre la competizione. Più gufi in un territorio generano meno risorse.
Anche altri rapaci come falchi e aquile si nutrono di gufi. Anche se questo non accade spesso, può risultare perché sia i gufi che i rapaci stanno combattendo nello stesso territorio. Di solito i gufi sono troppo grandi perché gli uccelli combattano efficacemente, e falchi e aquile li lasciano soli.
Volpi e linci si nutrono di giovani gufi o civette. Spesso inseguono e attaccano i nidi incustoditi. Tuttavia, i gufi adulti che proteggono i loro nidi possono uccidere volpi e gatti.
