Nelle cellule eucariotiche, la glicolisi ha luogo nel citosol. Dopo la glicolisi, i prodotti possono essere ulteriormente scomposti nei mitocondri.
La glicolisi descrive una serie di reazioni chimiche a cui una cellula viene sottoposta per produrre rapidamente energia. Una serie di reazioni in una cellula è chiamata via metabolica. La glicolisi inizia con le molecole di glucosio immagazzinate sotto forma di glicogeno che viene rilasciato e trasformato in un composto chiamato glucosio 6-fosfato. Per questo primo passo sono necessarie due molecole di adenosina trifosfato, che è la fonte di energia di una cellula. In totale, la glicolisi produce un totale di 4 ATP per molecola di glucosio, il che significa che c'è un guadagno netto di 2 ATP per molecola di glucosio da questo percorso.