L'enzima DNA helicase decomprime la doppia elica del DNA per consentirne la replicazione. L'elicasi di DNA ha una velocità di rotazione di 10.000 rotazioni al minuto e si sposta davanti alla forcella di replicazione. Svolge in modo continuo i filamenti di DNA per consentire alla DNA polimerasi di attaccare nuovi filamenti di nucleotidi.
DNA helicase è una struttura ad anello esamerica di sei subunità. Decomprime la doppia elica abbattendo i legami idrogeno che tengono insieme i fili del DNA. Dopo essere stato decompresso, il filo con il gruppo 3 '-OH diventa il filo principale, che può essere immediatamente replicato. Il filamento con il gruppo 5 '-OH è il filamento in ritardo e viene replicato successivamente in un processo noto come replicazione discontinua.